用途

RT-PCR用cDNA的合成

说明

本试剂盒使用的逆转录酶ReverTra Ace^®属于在高温反应性和反应效率方面进行了提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH^-)，与以往的RTase相比，可以合成更长的cDNA(已确认到可以合成cDNA长度最长可达14kb)。

特征

●高效率

使用高效率逆转录酶「ReverTra Ace^®」，可以高效率地合成cDNA。

●应用范围广

可用于使用Random Primer、Oligo dT Primer以及Specific Primer的各种逆转录情况。

●确证

因含有阳性对照（positive control）,可在确证各步骤的同时推进实验进展。

实验例

使用ReverTra Ace -α-^®以HeLa Total RNA(1μg)为模板，进行cDNA的合成后，使用各种PCR酶，以β-actin(838bp)为目的片段进行PCR反应。cDNA合成反应是在20μl的反应体系中，42℃下反应20min.，接着99℃进行5min的失活处理。然后，向合成的cDNA反应液中加入80μl的PCR溶液，使总体系达100μl，进行PCR反应。

结果显示，所有的酶都确认有扩增，ReverTra Ace -α-^®的逆转录产物可适用于各种PCR酶的扩增反应。

产品内容

ReverTra Ace^®100μl
5×RT Buffer*〔TRT-1B〕400μl
Random Primer〔FSK-301〕100μl
Oligo(dT)₂₀ Primer 〔FSK-201〕100μl
10mM dNTPs〔NTP-301〕200μl
RNase Inhibitor100μl
RNase Free H2O1.2ml


*5×RT Buffer与ReverTra^® Ace用的Buffer组分相同。

基本反应条件

〈cDNA合成〉
灭菌蒸馏水Xμl
模板RNA
100-1000ng total RNA
10-100ng mRNA
Primer
1μl Oligo(dT)20 Primer
1μl Random Primer
10pmoles* Specific Primer
5×RT Buffer4μl
10mM dNTPs2μl
ReverTra Ace^®1μl
RNase Inhibitor1μl

Total Volume20μl