Ligation high Ver.2

用途

DNA连接

说明

本试剂是以T4 DNA Ligase为主体的高效率单管型连接试剂，广泛应用于各种末端DNA的连接反应。通过对原产品进行改良，可简便地用于各种用途。本试剂是在原产品『Ligation high』基础上改良的使用更方便的高效率单管型连接试剂。只需与DNA片段混合，进行短时间反应，即可高效率地进行连接。可广泛用于突出末端、平滑末端及TA克隆等方面。

特征

●高效率
特别是TA克隆效率得到了大幅度的提高。下图是用各公司试剂盒对TA克隆效率的比较。

●即使在-20℃保存也不会冻结
从冷冻柜中取出后可立即使用。右图表示-20℃保存时试剂的状态[原来的产品:Ligation high〈绿〉、本产品:Ligation high Ver.2〈蓝〉]。

●简便的单管型

使用方法与原有产品一样，只要将试剂和DNA片段混合即可，非常简便。

实验例

1.DNA末端形状与连接效率的关系

在16℃条件下反应时，将DNA片段（0.5kb）的克隆效率与末端形状进行比较。结果可见，突出末端的连接约5分钟即可完成，而平滑末端及TA克隆30分钟约完成70〜80%。另外，平滑末端克隆及TA克隆时间超过1小时，到2小时为止，连接效率会逐渐提高。因此当克隆效率比较低时，可将反应时间提高至2小时左右可提高连接效率。

2.使用未经纯化的PCR产物的TA克隆

将T载体（50ng, 25fmol）和具有良好扩增效率的未纯化PCR产物（用Taq DNA polymerase扩增的0.5kb片段）按照各种比例混合，在该DNA溶液〈7.5μl〉中添加Ligation high Ver.2〈7.5μl〉，在16℃条件下反应30分钟。然后，用10μl反应液对E. coli DH5α感受态细胞〈100μl〉进行转化，用LB/Amp（X-Gal）培养基培养后点克隆数。结果可见，尽量少带入PCR反应液可得到良好的结果。　由于用纯化后的DNA片段可得到高效率，因此当效率低下时，可使用纯化后的PCR产物。