用途

●普通的TA克隆「TArget Clone^TM」
●KOD系列扩增得到的平滑末端产物的TA克隆「TArget Clone^TM-Plus-」
●对KOD系列扩增得到的平滑末端产物进行加dA反应「10×A-attachment Mix」

说明

特征

●快速・高效率
连接反应最快可在5分钟内完成。

●可靠
载体中有LacZ，可进行蓝白斑筛选。

●方便
在多克隆位点的两端带有转录用的启动子(T7、T3)，可用于转录产物的配制。

●可用于平滑末端PCR产物《TArget Clone -Plus-》
在TA克隆试剂盒中添附了『A-attachment Mix』，使用更方便，是KOD系列专用的TA克隆试剂盒。平滑末端PCR产物无需纯化，将其与『A-attachment Mix』混合，只需10分钟即可完成加dA反应。

实验例

使用各类PCR产物比较TA克隆的效率用高保真性酶KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2及Blend Taq，对来自human genome的β-globin基因0.5kb进行PCR扩增。分别用TArget Clone以及TArget Clone^TM -Plus-对未经纯化的PCR产物进行TA克隆，连接到pTA2 载体。结果可见，对KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2的扩增产物进行克隆时，使用TArget Clone^TM -Plus-，克隆效率可得到大幅度提高。

另一方面对Blend Taq的扩增产物进行克隆时，用TArget Clone^TM -Plus-相比，虽然效率有很大下降，但是使用TArget Clone也可以高效率地进行TA克隆。

【TAK-101】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
【TAK-201】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
10×A-attachment Mix 10μl　

基本反应条件

「TArget Clone」^TM

灭菌蒸馏水(3-X)μl

2×Ligation Buffer 5μl

pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

PCR产物Xμl

T4 DNA Ligase 1μl

Total Volume 10μl

室温(15～25℃)、30min.

「TArget Clone^TM -Plus-」

KOD酶扩增的PCR产物 9μl

10×A-attachment Mix 1μl

Total Volume 10μl

60℃、10min.

↓

灭菌蒸馏水(3-X)μl

2×Ligation Buffer 5μl

pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

上述处理后的PCR产物Xμl

T4 DNA Ligase 1μl

Total Volume 10μl

室温(15～25℃)、30min.