TOYOBO 产品常见问题 Q&A （PCR产品）

1、KOD FX Neo与 KOD FX的区别?

答：KOD FX Neo是在「KOD FX」的基础上，结合新开发的「KOD-Plus-Neo」的「延伸增强剂」等技术，抑制<停滞现象>，便长链目的片段-难配序目的片段、粗样品的扩增效率更高。以基因组DNA为模板最大可扩增40kb的片段，实现了30sec/kb的高速循环(粗样品推荐1min/kb)。

2、KOD-Plus-Neo与KOD-Plus-的区别?

答：KOD-Plus-Neo在高保真性PCR酶「KOD-Plu-」系列技术的基础上，应用了本公司新开发的「延伸增强剂」，保持了「KOD-Plus-」系列高保真性(约为Taq的80倍)的同时，通过抑制<停滞现象>，明显提高了对微量模板DNA、长目的片段的扩增效率。延伸时间缩短到30sec/kb。是高保真、高效车、高速的PCR酶。

3、FSK-101 与FSQ-101的区别?

答：FSK-101是用于RT-PCR的高效率cDNA合成试剂盒，适用于长链cDNA(10kb以上)的合成。FSQ-101是用于RT-qPCR的高效率cDNA合成试剂盒，通过改良，使得带入到Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小，即使在PCR反应体系中添加了多至20%体积的逆转录反应液，也能表现出良好的反应曲线。因此，最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。由于精简了试剂盒的构成，可非常简便地进行操作，仅需约15分钟的逆转录反应，即可得到充分的cDNA。

4、 Blend Taq 与 Blend Taq -Plus-的区别?

答： Blend Taq -Plus- 是在「Blend Taq」的酶溶液中预混了抗Taq单克隆抗体，采用热启动法，更提高了PCR 反应的灵敏度和特异性。

5、THUNDERBIRD qPCR Mix 与 Realtime PCR Master Mix 的区别?

答：THUNDERBIRD qPCR Mix 对 Realtime PCR Master Mix的组分进一步优化，使得反应特异性和PCR效率有了提升。THUNDERBIRD Next系列则在此基础上进一步提高了产品性能以及操作便捷性。

6、Ligation high Ver.2产生冻结或白色沉淀是否影响连接效率?

答：在-30℃以下长期保存，或在冷冻柜的冷气出风口处保存时，可能会产生冻结或白色沉淀，但经实验证明，将其融解后使用不影响活性。可用手指捏着离心管使其融解，但注意不要使其升温。

7、 Ligation high融解后有白色沉淀，是否影响使用?

答：作为稳定剂使用的BSA可能会形成沉淀，但对反应没有影响，无需将沉淀融解直接使用，不会影响连接效率。

8、为什么FSK-101/FSQ-101 中的5xRT Buffer 融解后有白色沉淀?

答：低温长期保存后，可能在短时间融解后buffer 中会有白色沉淀，请务必将其融解后使用，融解后不会对反应有影响。

9、 QPK/QPX系列产品中是否添附 ROX? ROX 的浓度是多少?

答：Realtime PCR Master Mix 中添附了1X浓度的 ROX。THUNDERBIRD Next qPCR Mix 中含有 passive reference dye，可代替ROX起到校正作用。

10、使用 ReverTra Ace-a.合成cDNA 时 RNA 热变性的作用?

答：热变性可消除RNA大多数二级结构，从而使引物可以结合。因此，对于容易形成高级结构的RNA可以提高逆转录的效率。

11、 使用Target Clone -Plus.时，为什么纯化后的PCR产物在添加10xA-attachment Mix之前需要添加PCR buffer、MgCl,和 dNTPs?

答：由于纯化后PCR反应液中的PCR buffer、MgCI,和dNTP都被去除了，因此要重新加入PCR buffer、MgCl,和dNTP，形成1XPCR 反应体系，以便3’端dA的附加。

12、使用ReverTra Ace qPCR RT Kit 制备的cDNA 做Realtime PCR，制备的cDNA需不需要稀释10倍以上使用?

答：可以不稀释10倍以上使用，但将其添加到RealtimePCR反应液时请不要超过20%的量。因为添加过量会降低PCR的反应效率。

13、SuperPrep ll Cell Lysis & RT Kit for qPCR可以处理的细胞数量范围是多少?

答：使用96孔板时，每个孔可处理的细胞数建议控制在1x10*1-7x10*4个之间。该上限因细胞种类而异，可在10*4数量级范围通过预实验来验证。

14、 MagExtractor-RNA-能否用于抽提植物组织Total RNA?

答：NPK-201F能从培养细胞、动物组织、酵母中抽提出TotalRNA，不能用于抽提植物组织Total RNA。

15、使用 KOD FX 时循环条件的设定三步法循环和两步法循环的区别?

答：当引物 Tm 值未满 73℃时，请用三步法。使用粗样品时，相比两步法，用三步法能得到更为稳定的结果。

16 、使用 KOD -Plus-/KOD-Plus-Ver.2时对引物设计的要求?

答：引物的 GC含量不可太高，长度应保持在22~34mer 的范围之内(Tm值>60°℃)。

另外，设计引物时要注意不要使其形成分子内二级结构、引物二聚体等情况。对长链目的片段进行扩增时，请使用Tm 值 65℃以上的引物。

17、 KOD One 的 PCR 反应条件没有预变性步骤，是否支持热启动?

答：支持。在以复杂样本为模板扩增时，增加预变性步骤可能提高PCR效果。

18 、QRT-101 可否加入Mn离子 后长期保存?

答：不可以，加入Mn离子 后在4℃保存三周后经检测会相差1~2个Ct值。

19、是否可以使用KOD -Plus-的10xPCR buffer 代替 SMK-101 中的 iPCR buffer?

答：可以使用10xPCR buffer 加MgSO4 代替 iPCR buffer，但突变效率会降低。

20、 FSQ-201 中的5xRT Master Mix 与FSQ-301 中的5xRT Master Mix Il是否可以混用?

答：不可以。FSQ-201中的5xRT Master Mix 与FSQ-301中的5xRT Master Mix Il组分不同，请勿混用。

另外，FSQ-301 中的5xRT Master Mix II要同试剂盒中的4xDN Master Mix组合使用进行逆转录反应。