基因编辑细胞方案？使用prepGEM，快速了解目标基因是否中靶！
发布日期：2023-08-18 17:16:58
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文章“CRISPR/Cas9-Directed Genome Editing UNIT 31.1 of Cultured Cells”，文中详细描述了Cas9介导的人类基因组工程的方案，包括构建和转染Cas9和引导RNA (gRNA)进入人诱导多能干细胞(hiPSCs)和HEK293细胞所需的方法。在基因组编辑之后，它还描述了使用下一代测序评估基因组编辑效率的方法，并分离了具有下游应用所需修饰的单克隆hiPSCs。 文中多次描述使用prepGEM进行快速提取。比如，使用prepGEM试剂盒，制备10uL细胞裂解液，取得PCR反应的DNA模板，直接进行PCR反应； 文中也描述到，在使用prepGEM提取时候，要适当延长prepGEM的消化时间，且用量不能超过1uL！ 可见prepGEM提取效率和回收率极高！
文章的作者杨璐菡，世界著名的女科学家，毕业于哈佛大学，长期使用CRISPR-Cas9的“基因剪刀”技术开展研究。近期，在杨璐菡博士的带领下，其名下企业“启函生物
”运用多位点基因编辑技术修改人源多能诱导干细胞（iPSC），并将其分化成为靶向CD19阳性B细胞肿瘤的自然杀伤细胞（NK）产品QN-019a，其临床适应症为CD19阳性的复发难治性侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤。该新药临床试验申请获批，标志着其所带领的启函生物研究团队的药学、非临床和临床已经进入一个新的阶段。
参考文献：Yang L, Yang JL, Byrne S, Pan J, Church GM (2014) CRISPR/Cas9-Directed Genome Editing UNIT 31.1 of Cultured Cells. Current Protocols in Molecular Biology 31.1.1-31.1.17. DOI: 10.1002/0471142727.mb3101s107
